雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 技術(shù)原理

熒光素底物在熒光素酶作用下會發(fā)光，且光強度能反應(yīng)熒光素酶的蛋白表達量。而熒光素酶的蛋白表達量，又和啟動子活性、mRNA的穩(wěn)定性及翻譯效率等有關(guān)。利用這個特點，將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達，再檢測其發(fā)光強度，就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。這就叫熒光素酶報告基因檢測。為了減少實驗誤差，一般會同時轉(zhuǎn)染一個能穩(wěn)定表達熒光素酶的質(zhì)粒作為內(nèi)參，所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。

雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 技術(shù)流程

圖一：啟動子活性分析示意圖

圖二：啟動子和轉(zhuǎn)錄因子互作分析示意圖

雙熒光素酶報告基因實驗 * 應(yīng)用背景

雙熒光素酶報告基因分析通常以螢火蟲熒光素酶為報告基因，以海腎熒光素酶為內(nèi)參基因。所構(gòu)成的報告系統(tǒng)具有靈敏度高、動態(tài)范圍廣、應(yīng)用靈活等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控、非編碼RNA靶向互作等研究領(lǐng)域。

輝駿生物根據(jù)以下兩種應(yīng)用制定不同的實驗方案，可針對客戶情況提出合適的建議>>

1. 檢測啟動子活性；

2. 檢測轉(zhuǎn)錄因子與目標(biāo)啟動子的相互作用。

 聯(lián)系技術(shù)支持 

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雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 服務(wù)信息

服務(wù)項目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實驗周期	客戶提供	價格
啟動子活性分析	合成和構(gòu)建2kb啟動子熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告	5-6周	待測細胞及其培養(yǎng)方法 實驗信息表	點擊詢價
	構(gòu)建不同截短啟動子的熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告
	細胞培養(yǎng)和雙熒光素酶檢測	檢測數(shù)據(jù)和實驗報告
啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證	構(gòu)建野生型和突變型啟動子的熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告	5-6周	待測細胞及其培養(yǎng)方法 轉(zhuǎn)錄因子基因質(zhì)粒模板及其原始測序文件 實驗信息表	點擊詢價
	構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子表達載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告
	細胞培養(yǎng)和雙熒光素酶檢測	檢測數(shù)據(jù)和實驗報告

雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 送樣要求

樣本類型	建議送樣量
目的基因模板	質(zhì)粒約2ug，或甘油菌約100ul
待測細胞	（廣州市內(nèi)客戶）可接受活細胞，2個T25瓶，細胞匯合度＞80%； （其他地區(qū)客戶）凍存細胞2管。

 聯(lián)系技術(shù)支持 

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雙熒光素酶檢測啟動子活性研究案例—客戶文章解析

Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in human colorectal cancer. 

Nature Communications. 2019, IF=12.121.

P300/YY1/miR-500A-5p/HDAC2信號軸調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌癌細胞增殖

研究概述

結(jié)直腸癌(CRC)是全球癌癥相關(guān)性死亡的主要原因之一，復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高。闡明CRC發(fā)生和轉(zhuǎn)移的機制將有助于尋找新的診斷生物標(biāo)志物和開發(fā)有效的治療干預(yù)措施。本研究發(fā)現(xiàn)miR-500a-5p在結(jié)直腸癌組織中下調(diào)，miR-500a-5p水平受到Y(jié)Y1/p300/HDAC2轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的協(xié)同調(diào)控。此外，miR-500a-5p還通過直接結(jié)合HDAC2的3’UTR來抑制結(jié)直腸癌細胞增殖和遷移。

研究路線

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)

? Label Free 實驗檢測服務(wù)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
? 廣泛靶向代謝組學(xué)

蛋白/核酸相互作用實驗

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細胞生物學(xué)實驗

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

?熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實驗服務(wù)

?miRNA靶基因驗證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動物細胞表達載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務(wù)

? 重組抗體表達

實驗試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實力

4899+客戶已添加微信獲取實驗優(yōu)惠！

輝駿生物提供的雙熒光素酶報告檢測啟動子活性服務(wù)主要分為以下兩種：

1. 啟動子活性分析，用于檢測待測啟動子是否有活性及其活性區(qū)域；

2. 啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證，用于研究某轉(zhuǎn)錄因子是否調(diào)控某基因的待測啟動子，以及它們的結(jié)合區(qū)域。

添加技術(shù)員微信溝通實驗

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雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/strong>*輝駿生物優(yōu)勢

Luc（雙熒光素酶報告基因）技術(shù)服務(wù)樣本要求

1. 送樣要求

2. 樣本保存和運輸要求：

（1）質(zhì)?；蚋视途捎帽４孢\輸；

（2）活細胞常溫取樣；

（3）凍存細胞干冰取樣/運輸：需要至少在送樣前一天通知我方。

雙熒光素酶檢測啟動子活性結(jié)果示例

雙熒光素酶報告基因檢測圖

雙熒光素酶檢測啟動子活性客戶文章

1. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684. 【研究內(nèi)容】：本研究采用熒光素酶報告分析、pull down、ChIP、RIP等方法，研究了新型非編碼RNA(LncRNA)lnc-GD2H在促進C2C12成肌細胞增殖分化和肌肉再生中的作用。結(jié)果表明，在成肌細胞增殖和分化過程中，lnc-GD2H的表達增強，且在成肌細胞增殖過程中，lnc-GD2H促進了增殖標(biāo)記基因的表達，并與c-Myc形成反饋環(huán)。在成肌細胞分化過程中，lnc-GD2H與NACA相互作用，減輕NACA對Myog的抑制作用，從而促進Myog的表達，促進分化。這些結(jié)果有助于理解lncRNAs調(diào)控成肌細胞增殖和分化的機制。 使用相關(guān)技術(shù): 啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證，轉(zhuǎn)錄因子驗證，雙熒光素酶如何檢測

2. Zhu J.Y. et al: Aryl Hydrocarbon Receptor Promotes IL-10 Expression in Inflammatory Macrophages Through Src-STAT3 Signaling Pathway. Frontiers in Immunology. 2018 , IF=4.716. 【研究內(nèi)容】：本研究首次大規(guī)模鑒定了家蠶絲腺中與絲素基因啟動子區(qū)域相互作用的蛋白質(zhì)，包括絲素重鏈(Fibre H)、絲素輕鏈(FiBL)和一個25kD的多肽蛋白(P25)。通過DNA pull down結(jié)合質(zhì)譜分析，從后絲腺中分別鑒定出198、292和247個或330、305和460個與FibH、FiBL和P25啟動子區(qū)域相互作用的蛋白質(zhì)。此外，在M4和L5D5中分別鑒定出135個和212個蛋白是FibH、FiBL和P25的共同互作蛋白。其中鑒定出31個潛在的轉(zhuǎn)錄因子，如Y-box和PolyA結(jié)合蛋白，它們在核苷酸結(jié)合、ATP結(jié)合或蛋白質(zhì)折疊中發(fā)揮作用。 使用相關(guān)技術(shù): Luc技術(shù)服務(wù)，啟動子活性分析檢測

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