GST pull-down試劑盒和His pull-down試劑盒簡(jiǎn)介

輝駿生物的GST pull-down試劑盒和His pull down試劑盒能夠高效調(diào)取GST融合蛋白或His融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。

在GST pull-down或His pull down實(shí)驗(yàn)前，先通過(guò)基因工程技術(shù)手段將目標(biāo)基因連入帶有GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽的原核表達(dá)載體中，并導(dǎo)入大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。之后，GST融合蛋白通過(guò)GTH（ Glutathione）樹(shù)脂純化，His融合蛋白通過(guò)Ni-NTA 樹(shù)脂純化。最后，加入樣本裂解液孵育，樣本中與GST或His融合蛋白有相互作用的蛋白便可被吸附而分離。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

蛋白pull-down試劑盒應(yīng)用

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會(huì)通過(guò)結(jié)合不同的伙伴來(lái)行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。以下列舉了可應(yīng)用蛋白 pull down試劑盒的幾個(gè)研究方向或研究領(lǐng)域：

1. 確定2個(gè)蛋白是否具有直接相互作用；

2. 確定蛋白之間結(jié)合的結(jié)構(gòu)域；

3. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制；

4. 酶和底物的作用機(jī)制；

5. 蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

GST pull down和His pull down試劑盒組分

試劑名稱	體積（20 Tests）	體積（40 Tests）	保存條件
GST標(biāo)簽純化樹(shù)脂/His標(biāo)簽純化樹(shù)脂	950 μL	1.9 mL	4 ℃
裂解緩沖液	24 mL	48 mL	4 ℃
漂洗液	70 mL	140 mL	4 ℃
洗脫緩沖液	1.1 mL	2.2 mL	4 ℃
蛋白酶抑制劑	600 μL	1.2 mL	-20 ℃

蛋白Pull down試劑盒優(yōu)勢(shì)

1、調(diào)取效率高：融合蛋白與樹(shù)脂親和力強(qiáng)，可以高效純化目標(biāo)蛋白及其互作蛋白；

2、適用范圍廣：優(yōu)化的裂解液配方適用于動(dòng)物、植物組織、微生物等各類型組織和細(xì)胞樣本；

3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜（LC-MS/MS）實(shí)驗(yàn)。

4、操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，適用于初學(xué)者。

pulldown試劑盒使用流程簡(jiǎn)述

1. 通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)帶有GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽的融合蛋白；

2. 在細(xì)菌上清液中加入GST標(biāo)簽親和純化樹(shù)脂或His標(biāo)簽親和純化樹(shù)脂，4 ℃孵育2 小時(shí)；

3. 將待測(cè)樣本裂解液加入上述體系中，4 ℃孵育過(guò)夜；

4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

GST pulldown和His pulldown試劑盒使用案例

GST pull down試驗(yàn)服務(wù)結(jié)果分析-輝駿生物

GST pull down WB結(jié)果圖（陽(yáng)性）

His pull down WB結(jié)果圖-輝駿生物.jpg

His pull down WB結(jié)果圖（陽(yáng)性）

GST Pull-down MS：Western blot檢測(cè)圖

GST pull down試劑盒廠家-大量現(xiàn)貨-輝駿生物

蛋白pull-down MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

蛋白pull down試劑盒—客戶文章

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=11.2.

2. Lin J.M. et al: A positive feedback loop between ZEB2 and ACSL4 regulates lipid metabolism to promote breast cancer metastasis. 2023. eLife. 1區(qū), IF=8.3.

3. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2區(qū), IF=9.2.

4. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區(qū), IF=8.4.