慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)原理

慢病毒（Lentivirus）是以人類免疫缺陷型病毒（HIV）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因工具，已剔除毒性基因，屬于假型病毒，安全性高；它能同時感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，可將攜帶的外源基因整合到細(xì)胞基因組中實(shí)現(xiàn)基因的高效表達(dá)。

慢病毒包裝系統(tǒng)由三部分組成：

1. 含有外源基因片段、外源基因的啟動子，以及其它病毒包裝、整合所需的順式作用元件，如HIV-1 的5’LTR 和 3’LTR以及其他輔助元件等。

2. 包裝質(zhì)粒：共2或3個，分別表達(dá)產(chǎn)生病毒包裝所必需的蛋白質(zhì)（反式作用元件）。

3. 包裝細(xì)胞：293T 細(xì)胞株，能夠在慢病毒載體和包裝質(zhì)粒mix 共轉(zhuǎn)染后包裝出慢病毒。

攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞，一段時間后收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，經(jīng)濃縮和純化的慢病毒液可以用于感染宿主細(xì)胞或活體動物。

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)流程

慢病毒包裝技術(shù)優(yōu)勢

① 慢病毒為整合型病毒，可實(shí)現(xiàn)外源基因或shRNA、miRNA穩(wěn)定、持久的表達(dá)，更適合于基因功能研究

② 更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，可以高效的表達(dá)外源基因。

③ 慢病毒感染率高，適用范圍廣（可感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞），特別適合于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞。

④ 包裝流程簡便，可以一次性獲得大量病毒且滴度高。

慢病毒包裝服務(wù)信息

輝駿生物提供的慢病毒包裝服務(wù)主要分為以下三種：

慢病毒包裝服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實(shí)驗(yàn)周期	客戶提供
表達(dá)慢病毒包裝	表達(dá)慢病毒包裝	載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和報(bào)告	2-3周	實(shí)驗(yàn)信息表（相關(guān)基因信息、載體要求、病毒量要求）
	包裝基因表達(dá)慢病毒	基因表達(dá)慢病毒液和對照慢病毒液	3-4周
	檢測慢病毒滴度	滴度檢測報(bào)告	3-4周
shRNA慢病毒包裝	采用客戶提供的shRNA或siRNA序列構(gòu)建shRNA慢病毒載體	載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和報(bào)告	2周	實(shí)驗(yàn)信息表（相關(guān)基因信息、載體要求、病毒量要求）
	包裝shRNA慢病毒	shRNA慢病毒液和對照慢病毒液	3-4周
	檢測慢病毒滴度	滴度檢測報(bào)告	3-4周
3+1 shRNA慢病毒包裝	針對基因序列設(shè)計(jì)并構(gòu)建3個shRNA慢病毒載體	載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和報(bào)告	2-3周	實(shí)驗(yàn)信息表（相關(guān)基因信息、載體要求、病毒量要求）
	shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行干擾效率檢測	干擾效率檢測結(jié)果和報(bào)告	2周
	干擾效率最高的shRNA質(zhì)粒包裝慢病毒	shRNA慢病毒液和對照慢病毒液	3-4周
	檢測慢病毒滴度	滴度檢測報(bào)告	3-4周

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慢病毒包裝結(jié)果示例

慢病毒包裝滴度檢測圖

**慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)*輝駿優(yōu)勢**

十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，客戶成果發(fā)表在NatureMethods，Oncogene，Cell Research等高水平期刊上。

自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線。

售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確?？蛻舭残倪M(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿。

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)-客戶文章

Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究內(nèi)容】：研發(fā)發(fā)現(xiàn)CD151在結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)組織中表達(dá)較高，能促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。RNA-seq和CoIP-MS實(shí)驗(yàn)同時檢測和篩選了受CD151表達(dá)影響且與CD151相互作用的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)了3個蛋白——TGFβ1，CEACAM6和LGR5。pull down和免疫熒光實(shí)驗(yàn)確定了它們間的相互作用。基因沉默和回復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，CD151可能通過TGFβ1來促進(jìn)CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技術(shù)：shRNA慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建

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Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究內(nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織和細(xì)胞中MafF（一種轉(zhuǎn)錄因子）的表達(dá)較低。慢病毒介導(dǎo)的MafF過表達(dá)抑制HCC細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。生物信息學(xué)分析和熒光素酶實(shí)驗(yàn)確定了MafF是miR-224-5p的直接靶點(diǎn)。RNA pull down實(shí)驗(yàn)表明，circ-ITCH可作為miR-224-5p海綿發(fā)揮作用?；虮磉_(dá)/回復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡明，MafF的表達(dá)和抗腫瘤作用可通過circ-ITCH/miR-224-5p軸調(diào)節(jié)。本研究證實(shí)了MafF在HCC中的抑癌作用，揭示了MafF的上游調(diào)控機(jī)制，為HCC的潛在治療靶點(diǎn)提供了新的視角。

使用技術(shù)：過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建

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Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究內(nèi)容】：酪胺受體（TAR）可被酪胺（TA）或章魚胺（OA）激活，并已被證明與多種昆蟲的生理調(diào)節(jié)（如味覺反應(yīng)、社會組織和學(xué)習(xí)行為）有關(guān)。作者在小菜蛾中新克隆得到一個酪胺受體基因Pxtar1，并在293T細(xì)胞中利用慢病毒進(jìn)行了該基因的穩(wěn)定表達(dá)，功能實(shí)驗(yàn)也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體，此外，作者還調(diào)查了Pxtar1在小菜蛾體內(nèi)的表達(dá)模式。

使用技術(shù)：過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建檢測、慢病毒包裝技術(shù)服務(wù)、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)

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He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究內(nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)FAM3B在人食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）組織中高表達(dá)，且與患者不良預(yù)后有相關(guān)性。慢病毒介導(dǎo)的FAM3B過表達(dá)抑制ESCC細(xì)胞凋亡，促進(jìn)ESCC細(xì)胞遷移和侵襲。進(jìn)一步研究證實(shí)，F(xiàn)AM3B調(diào)節(jié)AKT-MDM2-p53通路和EMT的兩個核心標(biāo)記物Snail和E-鈣粘蛋白。這些發(fā)現(xiàn)提示FAM3B可能是ESCC的一個有希望的分子靶點(diǎn)和診斷標(biāo)記物。

使用技術(shù)：慢病毒載體構(gòu)建技術(shù)、慢病毒包裝外包服務(wù)、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)

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He L.F. et al: FEN1 promotes tumor progression and confers cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer. Molecular Oncology. 2017, IF=6.603.

【研究內(nèi)容】：作者發(fā)現(xiàn)FEN1在肺癌細(xì)胞中高表達(dá)，在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EN1對肺癌細(xì)胞增殖來說很關(guān)鍵，抑制FEN1會導(dǎo)致DNA復(fù)制能力下降和DNA損傷積累，最終引發(fā)凋亡。FEN1水平改變還會影響肺癌細(xì)胞對化療藥物的響應(yīng)。小鼠實(shí)驗(yàn)也表明FEN1抑制劑的使用能夠阻礙肺癌發(fā)展。因此，該研究指出FEN1的有效利用可能會為肺癌靶向治療提供幫助。

使用技術(shù)：慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒包裝

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Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究內(nèi)容】：FEN1是一種含特殊結(jié)構(gòu)的核酸酶，對維持人基因組的穩(wěn)定性中有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)了與直腸癌相關(guān)的新FEN1突變，L209P。該突變?nèi)狈EN1的側(cè)翼內(nèi)切酶活性、外切酶活性及缺口內(nèi)切酶活性，但保留了DNA結(jié)合特性。體內(nèi)和體外的基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)表明，L209P突變能干擾野生型FEN1的功能，且對基因損傷更敏感，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)基因組的不穩(wěn)定和細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

使用技術(shù)：慢病毒載體構(gòu)建技術(shù)、慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)檢測

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