免疫共沉淀（Co-IP）* 實(shí)驗(yàn)原理

結(jié)合了抗體的磁珠或樹(shù)脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過(guò)”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時(shí)，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結(jié)合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物從Beads上洗脫下來(lái)，得到免疫共沉淀（Co-IP）產(chǎn)物。Co-IP產(chǎn)物既可以用Western Blot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜鑒定未知蛋白。

當(dāng)沒(méi)有合適的誘餌蛋白抗體時(shí)，還可以通過(guò)表達(dá)融合了Flag標(biāo)簽的誘餌蛋白，利用Flag標(biāo)簽抗體做免疫沉淀。即樣本過(guò)表達(dá)Flag-Bait，經(jīng)裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結(jié)合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經(jīng)洗滌、洗脫后，用WB或質(zhì)譜檢測(cè)。

免疫共沉淀（Co-IP）* 實(shí)驗(yàn)流程

內(nèi)源蛋白抗體免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)步驟

標(biāo)簽抗體免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)流程

免疫共沉淀（Co-IP）* 應(yīng)用背景

蛋白質(zhì)之間相互作用是其發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會(huì)通過(guò)結(jié)合不同的伙伴來(lái)行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。常見(jiàn)的蛋白互作研究方法主要有：免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補(bǔ)（BiFC）、熒光共定位等。這些方法相互補(bǔ)充，通過(guò)多種方法共同驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用，能更大程度的避免假陽(yáng)性結(jié)果。

技術(shù)支持聯(lián)系

18927549347、13430303037

免疫共沉淀Co-IP * 輝駿服務(wù)內(nèi)容

免疫共沉淀CoIP * 樣本要求

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷(xiāo)售索取。

 保存及運(yùn)輸：-80℃保存，干冰取樣/運(yùn)輸，至少在送樣前2天通知我司。

免疫共沉淀Co-IP * 結(jié)果示例

Co-IP WB：誘餌蛋白和待測(cè)蛋白Western blot檢測(cè)圖（陽(yáng)性）

Co-IP MS：誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖

Co-IP MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

Co-IP MS：互作蛋白生信分析結(jié)果（部分展示）

技術(shù)支持聯(lián)系

18927549347、13430303037

免疫共沉淀（Co-IP）服務(wù)案例—客戶(hù)文章解析

Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.

 Cancer Research. 2019. (中科院1區(qū)，IF=13.312).

膽固醇通過(guò)APMAP抑制EGFR降解誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移

研究概述

轉(zhuǎn)移性前列腺癌具有很高的致命性。已有報(bào)道表明，膽固醇與前列腺癌的發(fā)展有關(guān)；前期研究發(fā)現(xiàn)，膽固醇可以誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），但其作用及潛在機(jī)制尚不清楚。本研究證明膽固醇介導(dǎo)APMAP上調(diào)，APMAP通過(guò)與EGFR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPS15R，進(jìn)而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞EMT；提出APMAP可能是一種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)劑，為高脂肪飲食、肥胖和癌癥轉(zhuǎn)移之間提供了聯(lián)系。

研究路線(xiàn)

免疫共沉淀（Co-IP） * 客戶(hù)文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核。客戶(hù)利用酵母雙雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過(guò)抑制ABF4、ABI5對(duì)下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過(guò)在前列腺癌細(xì)胞表達(dá)3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶(hù)發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進(jìn)一步的研究證實(shí)，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過(guò)EGFR致使細(xì)胞發(fā)生EMT。 使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究?jī)?nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻?hù)在這項(xiàng)研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個(gè)應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。 使用相關(guān)技術(shù)：coip技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點(diǎn)鑒定

免疫共沉淀（CoIP）* 輝駿服務(wù)優(yōu)勢(shì)

輝駿實(shí)力

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀服務(wù)分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測(cè)某樣本中的誘餌蛋白和待測(cè)蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

加技術(shù)專(zhuān)員微信了解Co-IP實(shí)驗(yàn)服務(wù)排期、優(yōu)惠等

18927549347、13430303037

CoIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷(xiāo)售索取。

2. 樣本保存和運(yùn)輸要求：

（1）樣本用PBS清洗干凈后，離心去掉液體，先放入液氮中速凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存；

（2）樣本一定要做好標(biāo)記，應(yīng)用油性防凍記號(hào)筆或標(biāo)簽紙?jiān)诠苌献⒚鳂颖久Q(chēng)或編號(hào)；

（3）樣本較多或需要分批做，要將樣本分裝；

（4）干冰取樣/運(yùn)輸；需要至少在送樣前一天通知我方。

免疫共沉淀coip實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖例

Co-IP WB：誘餌蛋白和待測(cè)蛋白Western blot檢測(cè)圖（陽(yáng)性）

Co-IP MS：誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖

Co-IP MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

Co-IP（免疫共沉淀）實(shí)驗(yàn)服務(wù)客戶(hù)文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核?？蛻?hù)利用酵母雙雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過(guò)抑制ABF4、ABI5對(duì)下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過(guò)在前列腺癌細(xì)胞表達(dá)3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶(hù)發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進(jìn)一步的研究證實(shí)，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過(guò)EGFR致使細(xì)胞發(fā)生EMT。 使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究?jī)?nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻?hù)在這項(xiàng)研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個(gè)應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。 使用相關(guān)技術(shù)：CoIP技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點(diǎn)鑒定

4899+客戶(hù)已添加微信獲取實(shí)驗(yàn)優(yōu)惠！

添加微信領(lǐng)取coip試劑盒說(shuō)明書(shū)

18927549347、13430303037

免疫共沉淀試劑盒（Co-IP試劑盒）簡(jiǎn)介

輝駿生物的免疫共沉淀試劑盒能夠高效完成抗原的免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)。首先，將特異性的抗體加入樣品中與目標(biāo)抗原形成免疫復(fù)合物，然后將其結(jié)合在protein G或protein A/G beads上。通過(guò)漂洗去除未結(jié)合物質(zhì)后，用低 pH 的洗脫液將免疫復(fù)合物從beads上洗脫下來(lái)。洗脫的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP試劑盒應(yīng)用

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式。CO-IP試劑盒采用Protein G或Protein A/G beads來(lái)捕獲目標(biāo)蛋白抗體，進(jìn)而捕獲樣本中天然結(jié)合的目標(biāo)蛋白及其互作蛋白。以下列舉了可應(yīng)用CO-IP試劑盒的幾個(gè)研究方向：

1. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制；

2. 酶和底物的作用機(jī)制；

3. 天然狀態(tài)下蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

CoIP免疫共沉淀試劑盒組分

Co-IP免疫共沉淀試劑盒優(yōu)勢(shì)

   

1、特異性強(qiáng)：親和材料經(jīng)過(guò)特殊優(yōu)化，與誘餌蛋白結(jié)合力更強(qiáng)，調(diào)取的互作蛋白更多。

2、裂解效率高：不同優(yōu)化的裂解液配方分別適用于動(dòng)物、植物樣本。

3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜（LC-MS/MS）實(shí)驗(yàn)。

4、操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，適用于初學(xué)者。

5、應(yīng)用靈活：可用于任何內(nèi)源性目標(biāo)蛋白的免疫沉淀或免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)。

免疫共沉淀Co-IP試劑盒使用流程簡(jiǎn)述

1. 將細(xì)胞裂解液與所選抗體在室溫下孵育 1-2 小時(shí)，或 4 ℃ 過(guò)夜。

2. 在室溫下，將抗原/抗體復(fù)合物與protein G或ProteinA/G beads結(jié)合 1-2 小時(shí)。

3. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

CoIP試劑盒-客戶(hù)文獻(xiàn)

1. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research. 2019. IF= 13.312.

2. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020. IF=12.067. 

3. Li T. et al: Phosphorylated ATF1 at Thr184 promotes metastasis and regulates MMP2 expression in gastric cancer. J Transl Med. 2022. IF=8.44.