GST pull down技術(shù)是體外條件下研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。先將體外表達(dá)的GST融合蛋白結(jié)合到谷胱甘肽Beads上，再將靶蛋白-GST-Beads和動(dòng)物、植物或微生物樣本裂解液孵育，這樣互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗滌掉未結(jié)合的蛋白后，再用洗脫液將互作蛋白復(fù)合物從Beads洗脫下來，即GST pull down產(chǎn)物。這種互作復(fù)合物既可以用Western Blot檢測(cè)已知蛋白，也可用質(zhì)譜鑒定出未知蛋白。

GST pull-down * 實(shí)驗(yàn)流程

GST pull-down * 應(yīng)用背景

聯(lián)系技術(shù)支持

18927549347、13430303037

GST pull-down * 輝駿服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實(shí)驗(yàn)周期	客戶提供	價(jià)格
GST pull down WB （驗(yàn)證型）	誘餌蛋白原核表達(dá)載體構(gòu)建（選做）	載體質(zhì)粒、測(cè)序結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告	4-5周	誘餌基因質(zhì)粒模板 實(shí)驗(yàn)樣本 待測(cè)蛋白抗體 實(shí)驗(yàn)信息表	點(diǎn)擊詢價(jià)
	誘餌蛋白原核表達(dá)和Western blot檢測(cè)	誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖
	樣本中待測(cè)蛋白的Western blot檢測(cè)	待測(cè)蛋白Western blot檢測(cè)圖
	GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 （實(shí)驗(yàn)組、空載對(duì)照組）	誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖 pull down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
GST pull down  MS （篩選型）	誘餌蛋白原核表達(dá)載體構(gòu)建（選做）	載體質(zhì)粒、測(cè)序結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告	6-7周	誘餌基因質(zhì)粒模板 實(shí)驗(yàn)樣本 實(shí)驗(yàn)信息表	點(diǎn)擊詢價(jià)
	誘餌蛋白原核表達(dá)和Western blot檢測(cè)	誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖
	GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 （實(shí)驗(yàn)組、GST對(duì)照組、裂解液對(duì)照組）	誘餌蛋白Western blot檢測(cè)圖 pull down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
	LC-MS/MS檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析	質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果及報(bào)告 互作蛋白篩選表格 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告

GST pull-down * 樣本要求

樣本類型	GST pull down WB建議送樣量	GST pull down MS建議送樣量
動(dòng)物細(xì)胞	3*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約3個(gè)10cm皿）	5*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約5個(gè)10cm皿）
動(dòng)物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實(shí)	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

 保存及運(yùn)輸：-80℃保存，干冰取樣/運(yùn)輸，至少在送樣前2天通知我司。

GST pull-down * 結(jié)果示例

GST pull down WB結(jié)果圖（陽性）

GST Pull-down MS：Western blot檢測(cè)圖

GST pull-down MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

GST pull-down MS：互作蛋白生信分析結(jié)果（部分展示）

聯(lián)系技術(shù)支持

18927549347、13430303037

GST pull-down服務(wù)案例—客戶文章解析

Chen S.L. et al:  A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1區(qū)，IF=13.312).

GYS2/p53負(fù)反饋環(huán)抑制HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的腫瘤生長

研究概述

糖代謝異常是癌癥的突出特征，作者前期研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌(HCC)中糖原含量降低，并與患者總體生存情況不良相關(guān)，探索HCC中的異常糖代謝機(jī)制或許可以為肝細(xì)胞癌的治療提供新靶點(diǎn)。本研究首次報(bào)道了HCC組織中的糖原含量顯著降低，并與患者的不良預(yù)后相關(guān)，這歸因于新發(fā)現(xiàn)的HBx/GYS2/p53信號(hào)軸。低表達(dá)的GYS2促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖而非遷移，并提供了兩條獨(dú)立的證據(jù)來支持GYS2和p53之間的關(guān)系。一方面，GYS2與MDM2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合p53，以穩(wěn)定p53免于蛋白酶體降解；另一方面，p53以負(fù)反饋方式抑制GYS2表達(dá)和糖原含量。這些數(shù)據(jù)表明p53和GYS2可能通過平衡彼此的表達(dá)而在HCC中發(fā)揮功能。

研究路線

GST pull down服務(wù) * 客戶文章

1. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2區(qū), IF=10.75. 【研究內(nèi)容】：足細(xì)胞損傷是慢性腎臟疾病(CKD)的常見標(biāo)志。本研究證實(shí)Flot2在足細(xì)胞中表達(dá)，且能減少足細(xì)胞損傷。在LPS/ADR誘導(dǎo)腎病小鼠模型中，足細(xì)胞特異性Flot2的缺失會(huì)加重蛋白尿、足細(xì)胞損傷和腎小球病變。通過GST pull down和Co-IP實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Flot2和podocin通過SPFH結(jié)構(gòu)域直接相互作用。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)Flot-2是轉(zhuǎn)錄因子KLF15的直接靶點(diǎn)。 使用相關(guān)技術(shù): GST pull down實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀Co-IP

2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312. 【研究內(nèi)容】：糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達(dá)明顯下調(diào)，并與糖原含量降低和不良患者預(yù)后相關(guān)。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，阻止MDM2介導(dǎo)的p53泛素化和降解；GYS2還增強(qiáng)了p300誘導(dǎo)的p53蛋白K373/382位點(diǎn)的乙酰化，進(jìn)而負(fù)反饋抑制了HBx/HDAC1復(fù)合物支持下的GYS2轉(zhuǎn)錄，從而限制乙肝病毒相關(guān)性肝癌的生長。 使用相關(guān)技術(shù): GST 融合蛋白、GST pulldown實(shí)驗(yàn)、GST pull-down技術(shù)

3. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區(qū), IF=8.4. 【研究內(nèi)容】：波形蛋白（vimentin）在乙肝病毒X（HBX）陽性的肝癌細(xì)胞和HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌（HCC）組織中的表達(dá)均升高。機(jī)制研究表明，HBX能夠通過LASP1增強(qiáng)了vimentin的表達(dá)。一方面，PI3-K、ERK和STAT3信號(hào)通路參與了LASP1介導(dǎo)的vimentin上調(diào)。另一方面，GST pull down方法確定了HBX直接與vimentin和LASP1相互作用，保護(hù)vimentin免受泛素化介導(dǎo)的蛋白降解，促進(jìn)Vimentin蛋白的穩(wěn)定性。 使用相關(guān)技術(shù): GST-pull down實(shí)驗(yàn)，gst pull down-ms實(shí)驗(yàn)，LC-MS/MS蛋白質(zhì)譜鑒定

4. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2區(qū), IF=6.208. 【研究內(nèi)容】：α-烯醇化酶(ENO1)是一種代謝酶，與口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究通過GST pull down MS尋找與轉(zhuǎn)移性O(shè)SCC患者術(shù)后淋巴引流液（PLD）中的ENO1相互作用的蛋白，發(fā)現(xiàn)了ENO1的新互作蛋白ApoC3。兩者的結(jié)合引起白細(xì)胞介素(IL)-8的產(chǎn)生，進(jìn)而激活Jurkat T細(xì)胞STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制Jurkat T細(xì)胞增殖。 使用相關(guān)技術(shù): GST pull-down MS實(shí)驗(yàn)，gst pulldown實(shí)驗(yàn)，LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定

GST pull down * 輝駿服務(wù)優(yōu)勢(shì)

1

近十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，服務(wù)客戶眾多，案例發(fā)表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上

2

對(duì)蛋白互作的篩選鑒定理解深刻，擅長針對(duì)客戶具體情況提出合適的方案建議

3

自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線

4

自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái)，對(duì)微量CoIP實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力，對(duì)后續(xù)的生物信息分析有獨(dú)到的見解

5

售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確?？蛻舭残拿庖吖渤恋硐掠螌?shí)驗(yàn)及投稿

輝駿實(shí)力

輝駿生物提供的GST Pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)分為以下兩種：

1. GST Pull down WB，用于體外檢測(cè)誘餌蛋白與某樣本中的待測(cè)蛋白是否存在相互作用；

2. GST Pull down MS，用于體外篩選誘餌蛋白與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。

聯(lián)系技術(shù)支持了解pull down實(shí)驗(yàn)服務(wù)排期、優(yōu)惠等

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GST pull down技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì)*輝駿生物

GST pull down實(shí)驗(yàn)服務(wù)樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

2. 樣本保存和運(yùn)輸要求：

（1）樣本用PBS清洗干凈后，離心去掉液體，先放入液氮中速凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存；

（2）樣本一定要做好標(biāo)記，應(yīng)用油性防凍記號(hào)筆或標(biāo)簽紙?jiān)诠苌献⒚鳂颖久Q或編號(hào)；

（3）樣本較多或需要分批做，要將樣本分裝；

（4）干冰取樣/運(yùn)輸；需要至少在送樣前一天通知我方。

GST pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例

gst pull down WB：Western blot檢測(cè)圖（陽性）

GST Pull-down MS：Western blot檢測(cè)圖

GST pulldown MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

GST pulldown MS蛋白生信分析結(jié)果示例

GST pull down實(shí)驗(yàn)服務(wù)客戶文章

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312. 【研究內(nèi)容】：糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達(dá)明顯下調(diào)，并與糖原含量降低和不良患者預(yù)后相關(guān)。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，阻止MDM2介導(dǎo)的p53泛素化和降解；GYS2還增強(qiáng)了p300誘導(dǎo)的p53蛋白K373/382位點(diǎn)的乙?；?，進(jìn)而負(fù)反饋抑制了HBx/HDAC1復(fù)合物支持下的GYS2轉(zhuǎn)錄，從而限制乙肝病毒相關(guān)性肝癌的生長。 使用相關(guān)技術(shù): gst pulldown測(cè)定、GST-pull down質(zhì)譜分析、GST標(biāo)簽蛋白

2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015，IF=14.467. 【研究內(nèi)容】：Wnt/β-catenin信號(hào)在內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成活性中起重要作用。過表達(dá)實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)錄因子Bach1過表達(dá)可抑制后肢缺血小鼠的血管生成，并抑制Wnt3a刺激的血管生成反應(yīng)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Wnt/β-catenin靶基因的表達(dá)。Co-IP實(shí)驗(yàn)和gst pull-down分析表明，Bach1直接與TCF4結(jié)合，并減少β-catenin與TCF4的相互作用。研究揭示了Bach1抑制外周缺血損傷后的血管生成的作用機(jī)制，為血管生成治療或其他涉及Wnt/β-catenin通路異常調(diào)節(jié)的疾病提供了新的治療靶點(diǎn)。 使用相關(guān)技術(shù): GST 融合蛋白、GST pull-down實(shí)驗(yàn)、GST pull-down技術(shù)

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GST pull-down試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介

輝駿生物的GST pull-down試劑盒能夠高效調(diào)取GST融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。在GST pull-down實(shí)驗(yàn)前，先通過基因工程技術(shù)手段將目標(biāo)基因和GST基因序列連接起來，并導(dǎo)入大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)和純化，之后融合蛋白通過GST標(biāo)簽與固相化在載體上的GTH（ Glutathione）親和結(jié)合。接下來，當(dāng)樣本中與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時(shí)或與此固相復(fù)合物混合時(shí)就可被吸附而分離。

GST pull down試劑盒組分

GST Pull down試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)*輝駿生物

1、調(diào)取效率高：GST融合蛋白與樹脂親和力強(qiáng)，可以高效純化目標(biāo)蛋白及其互作蛋白；

2、適用范圍廣，優(yōu)化的裂解液配方適用于動(dòng)物、植物組織、微生物等各類型組織和細(xì)胞樣本；

3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜（LC-MS/MS）實(shí)驗(yàn)；

4、操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，適用于初學(xué)者。

GST pulldown試劑盒使用流程簡(jiǎn)述

1. 通過原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)帶有GST標(biāo)簽的融合蛋白；

2. 在細(xì)菌上清液中加入GST標(biāo)簽親和純化樹脂，4 ℃孵育2 小時(shí)；

3. 將待測(cè)樣本裂解液加入上述體系中，4 ℃孵育過夜；

4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

GST pull down試劑盒—客戶文章

1. Ni P.Y. et al: YBX1-Mediated DNA Methylation-Dependent SHANK3 Expression in PBMCs and Developing Cortical Interneurons in Schizophrenia. Advanced Science. 2023. IF=17.521. 

2. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684. 

3. Ma Y. et al: New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Scientific Reports. 2021, IF=4.379.