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TAP串聯(lián)親和純化試劑盒

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TAP串聯(lián)親和純化試劑盒簡(jiǎn)介

輝駿生物的TAP串聯(lián)親和純化試劑盒能夠高效完成雙標(biāo)簽（Flag和TST）融合蛋白的純化及其互作蛋白的調(diào)取。將Flag標(biāo)簽、TST標(biāo)簽與目標(biāo)蛋白在目的細(xì)胞中融合表達(dá)，分別采用TST樹(shù)脂和Flag樹(shù)脂進(jìn)行兩步串聯(lián)的親和純化，最終獲得目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。洗脫的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

FLAG-tag 是一段由8個(gè)氨基酸殘基組成，N-DYKDDDDK-C (1012 Da)，其作用是標(biāo)記蛋白。在蛋白表達(dá)和定位研究中，可以通過(guò)基因工程技術(shù)手段將所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列連接起來(lái)，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞中或胚胎干細(xì)胞亦或受精卵中。

TST標(biāo)簽是strep-tagⅡ（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）的升級(jí)版，由兩個(gè)strep-tagⅡ外加連接臂組成，與融合蛋白結(jié)合能力更強(qiáng)，結(jié)合位點(diǎn)更多，其作用是標(biāo)記蛋白。在蛋白表達(dá)和定位研究中，可以通過(guò)基因工程技術(shù)手段將所要研究的目的基因和TST-tag基因序列連接起來(lái)，可以連接在目的蛋白的C端或N端，然后將整合后的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞中或胚胎干細(xì)胞亦或受精卵中。

TAP串聯(lián)親和純化試劑盒應(yīng)用

TAP捕獲的是樣本中天然結(jié)合的蛋白復(fù)合體，反應(yīng)了體內(nèi)真實(shí)的生理結(jié)合；而且TAP技術(shù)特別適合于組學(xué)水平上的互作蛋白大規(guī)模研究。以下列舉了可應(yīng)用TAP串聯(lián)親和純化試劑盒的幾個(gè)研究方向：

1、應(yīng)用于低豐度蛋白的富集和濃縮

2、已知蛋白的功能驗(yàn)證

3、分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物

串聯(lián)親和純化TAP試劑盒組分（20次）

試劑名稱	體積	保存條件
TST樹(shù)脂	2mL	4 ℃
Flag樹(shù)脂	1mL	-20 ℃
裂解緩沖液	3*50mL	4 ℃
漂洗緩沖液A	10mL	-20 ℃
洗脫緩沖液B	1mL	-20 ℃

TAP串聯(lián)親和純化檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)

1、既可用于TST和Flag雙標(biāo)簽蛋白的串聯(lián)純化，又可用于TST或Flag單標(biāo)簽蛋白的純化；

2、抗體與樹(shù)脂偶聯(lián)，因此純化復(fù)合物中幾乎不含抗體污染，Western Blot或LC-MS檢測(cè)不受影響；

3、串聯(lián)純化可以有效降低互作蛋白的假陽(yáng)性率，使后續(xù)驗(yàn)證更加簡(jiǎn)單；

4、親和材料經(jīng)過(guò)特殊優(yōu)化，與誘餌蛋白結(jié)合更多且結(jié)合力更強(qiáng)。

TAP實(shí)驗(yàn)試劑盒使用流程簡(jiǎn)述

1. 將細(xì)胞裂解液與TST樹(shù)脂，室溫下孵育1-2小時(shí)，或4 ℃過(guò)夜。

2. 在室溫下，經(jīng)過(guò)漂洗，洗脫得到洗脫液1。

3. 在洗脫液1中加入到Flag樹(shù)脂中，室溫孵育2-3小時(shí)，或4 ℃過(guò)夜。

4. 室溫下，漂洗，加洗脫緩沖液B得到最終洗脫產(chǎn)物。

TAP試劑盒-客戶文獻(xiàn)

1. Novel interacting proteins identified by tandem affinity purification coupled to nano LC-MS/MS interact with ribosomal S6 protein kinase 4 (RSK4) and its variant protein (RSK4m). Int J Biol Macromol. 2017. IF= 7.8.

2. Differential Rac1 signalling by guanine nucleotide exchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration. Nature communication. 2016. IF=16.6.

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