臨床診斷實(shí)驗(yàn)室主要依賴(lài)于診斷感染的傳統(tǒng)表型方法,有時(shí)還依賴(lài)基因測(cè)序技術(shù)。技術(shù)的最新進(jìn)展包括已進(jìn)入日常微生物實(shí)踐的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間 (MALDI-TOF) 質(zhì)譜。MALDI-TOF 質(zhì)譜法產(chǎn)生特定的質(zhì)譜指紋,可以看作是微生物的獨(dú)特特征,有助于準(zhǔn)確識(shí)別屬和種水平——具有用于菌株分型的巨大潛力。
幾種利用 MALDI-TOF質(zhì)譜的方法現(xiàn)在正在微生物診斷實(shí)驗(yàn)室中使用。一種方法將結(jié)果與市售質(zhì)譜特征數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較以識(shí)別樣本細(xì)菌,第二種方法使用蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)從測(cè)序基因組中識(shí)別細(xì)菌中的生物標(biāo)志物質(zhì)量。 第二種生物信息學(xué)方法允許培養(yǎng)物生長(zhǎng)和樣品處理?xiàng)l件的變化差異,而第一種方法在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室方法中特別有用,例如診斷,并且可以區(qū)分物種和亞種。
鑒于其準(zhǔn)確性,該技術(shù)還可以直接應(yīng)用于各種臨床樣本,最顯著的是血液、腦脊液、尿液、胸膜液和腹膜液。 由于當(dāng)前 MALDI-TOF 協(xié)議的檢測(cè)限制,主要限制是樣本中存在的細(xì)菌數(shù)量。
為了繞過(guò)這個(gè)缺點(diǎn),通常需要大量的血液和尿液樣本,以及使用培養(yǎng)物作為血液的額外富集。
使用上述兩種方法中的任何一種使用 MALDI-TOF 質(zhì)譜法進(jìn)行細(xì)菌鑒定的結(jié)果,診斷率和準(zhǔn)確性在很大程度上取決于細(xì)菌分類(lèi)和所用數(shù)據(jù)庫(kù)的質(zhì)量。
使用 MALDI-TOF 技術(shù)鑒定細(xì)菌的主要優(yōu)勢(shì)之一是結(jié)果的快速可用性,通常在不到一個(gè)小時(shí)內(nèi)就可以準(zhǔn)備好。 此外,MALDI-TOF 質(zhì)譜法能夠精確鑒定具有稀缺表型特征并且在 MALDI-TOF 時(shí)代之前需要進(jìn)行 16S rRNA 基因測(cè)序的大量細(xì)菌。
MALDI-TOF 質(zhì)譜法快速成功地用于真菌鑒定。 目前,該方法主要用于常規(guī)酵母鑒定,但需要進(jìn)一步開(kāi)發(fā)(尤其是在樣品制備協(xié)議和數(shù)據(jù)庫(kù)中)以將該方法用于其他真菌群(如皮膚癬菌和絲狀真菌)。
與細(xì)菌的情況類(lèi)似,MALDI-TOF 質(zhì)譜法對(duì)真菌屬和種的錯(cuò)誤識(shí)別或未識(shí)別本質(zhì)上是由于數(shù)據(jù)庫(kù)中的錯(cuò)誤、缺失或不完整的參考光譜造成的。 缺點(diǎn)是目前包含在商業(yè)上可訪問(wèn)的 MALDI-TOF 質(zhì)譜系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)中的參考光譜不完整。
與傳統(tǒng)的微生物鑒定方法相比,MALDI-TOF 質(zhì)譜法在大多數(shù)情況下都能顯著縮短工程師/技術(shù)人員的工作時(shí)間(準(zhǔn)備樣品)和周轉(zhuǎn)時(shí)間(通過(guò)自動(dòng)化分析程序獲得結(jié)果)。
MALDI-TOF MS 用于各種行業(yè),包括生物制藥、有機(jī)化學(xué)、代謝組學(xué)和基因組學(xué),以及臨床和診斷和治療應(yīng)用。 在有機(jī)化學(xué)應(yīng)用中,MALDI-TOF 用于分析 核酸 、蛋白質(zhì)和聚合物質(zhì)量,以及識(shí)別寡核苷酸和小蛋白質(zhì)的復(fù)雜混合物,為生化和化學(xué)研究人員提供有用的信息。 MALDI-TOF MS 在促進(jìn)患者快速診斷和改善健康結(jié)果方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。 這方面的一個(gè)主要例子是它用于臨床微生物學(xué)的患者樣本中微生物的常規(guī)分類(lèi)。
總之,MALDI-TOF 質(zhì)譜法是一種引人入勝的微生物鑒定新技術(shù),它快速、高效、具有成本效益且易于使用。
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