分子生物學(xué)是一個(gè)生物學(xué)領(lǐng)域,涉及基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生 RNA、RNA 翻譯成蛋白質(zhì)以及這些蛋白質(zhì)在細(xì)胞功能中所起的作用的過(guò)程。 自 1960 年左右以來(lái),分子生物學(xué)家已經(jīng)開(kāi)發(fā)出方法來(lái)識(shí)別、分離和操縱細(xì)胞中的分子成分,包括 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)。
下面描述了分子生物學(xué)領(lǐng)域中使用的幾種技術(shù)。
1.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) – 這是分子生物學(xué)中最重要的技術(shù)之一,主要用于復(fù)制 DNA。PCR 允許將單個(gè) DNA 序列擴(kuò)增成數(shù)百萬(wàn)個(gè) DNA 分子。 PCR 還可用于在 DNA 中引入突變或引入特殊的限制酶位點(diǎn)。 此外,PCR用于確定某個(gè)DNA片段是否存在于cDNA文庫(kù)中。不同類(lèi)型的 PCR 包括用于擴(kuò)增 RNA 的逆轉(zhuǎn)錄 PCR (RT-PCR) 和用于測(cè)量存在的 RNA 或 DNA 量的定量 PCR (QPCR)。
2.表達(dá)克隆——這種技術(shù)有助于科學(xué)家了解蛋白質(zhì)的功能。使用 PCR 將編碼特定蛋白質(zhì)的 DNA 克隆或復(fù)制到稱(chēng)為質(zhì)粒的表達(dá)載體中。將質(zhì)粒引入動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞。 該質(zhì)粒具有可刺激所需蛋白質(zhì)高表達(dá)的啟動(dòng)子元件,因此可以檢查其酶活性。
3.凝膠電泳——這是分子生物學(xué)中使用的另一種重要技術(shù),通過(guò)在 DNA 穿過(guò)瓊脂糖凝膠時(shí)施加電場(chǎng),根據(jù)它們的大小分離 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)。
4.大分子印跡和探測(cè)——Southern印跡、Northern印跡、Western印跡和Eastern印跡等過(guò)程用于將DNA或RNA蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜上(通常在凝膠電泳之后),以便對(duì)其進(jìn)行染色或放射性標(biāo)記,然后進(jìn)行可視化。
5.陣列 – DNA 微陣列或 DNA 芯片是安裝在固體表面(如顯微鏡載玻片)上的 DNA 斑點(diǎn)的集合,可用于同時(shí)量化大量基因的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。該技術(shù)還可用于對(duì)各種不同的基因組區(qū)域進(jìn)行基因分型。
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