iTRAQ 定量蛋白質(zhì)分析的基本原理是在末端氨基和賴氨酸側(cè)將具有共價(jià)鍵的標(biāo)記肽與 iTRAQ 試劑結(jié)合，通過高效液相色譜、初級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜分離后，可以對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行表征和相對定量。

iTRAQ 分析適用于廣泛的樣品來源，幾乎所有收集的樣品都可以在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中使用該技術(shù)進(jìn)行篩選。  無論是尋找功能性蛋白質(zhì)、機(jī)理探索，還是篩選疾病生物標(biāo)志物，iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)都能以最便捷的方式將樣本轉(zhuǎn)化為研究結(jié)果。

理論上，iTRAQ 分析 需要每個樣品至少 300 μg 的蛋白質(zhì)才能達(dá)到通常低于 100% 的成功實(shí)驗(yàn)率。 因此，理想情況下，每次實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的蛋白質(zhì)量應(yīng)足以進(jìn)行兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。 此外，收集的樣本可能并不總是滿足調(diào)查的需要。 因此，需要對選定的樣本以及如何充分處理它們給予更多的思考。

樣本種類繁多，包括組織、細(xì)胞、血液（血清或血漿）、腦脊液、尿液、骨骼、關(guān)節(jié)滑液等，不同樣本的采集方法也不同。  一般來說，需要滿足以下幾點(diǎn)：

1.代表性樣品 ：

樣品的代表性直接關(guān)系到檢測結(jié)果的科學(xué)意義； 因此，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖屑?xì)選擇抽樣方案。 實(shí)驗(yàn)樣品和對照之間不應(yīng)有污染。 如果可用，來自實(shí)驗(yàn)組和對照組的樣品應(yīng)在采樣時間、地點(diǎn)和處理?xiàng)l件方面保持一致。 否則，可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的整體可信度。 體液樣本需要通過逐步離心（或膜）去除干擾因素，包括但不限于細(xì)胞、細(xì)胞碎片和細(xì)菌。 不同樣本來源的蛋白質(zhì)組是多種多樣的，甚至同一組織樣本的不同細(xì)胞也可以有顯著差異； 因此，量化兩個可能不相關(guān)的樣本是不可比的。 因此，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)以制備樣品時，考慮生物實(shí)驗(yàn)中的單變量原理非常重要。

2.樣品準(zhǔn)確性 ：

必須準(zhǔn)確記錄各種代表性樣品的數(shù)據(jù)。 所有樣品必須按要求（低溫和即時）收集、制備、儲存和運(yùn)輸，從而根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)獲得最終數(shù)據(jù)。

3.樣品時效性 ：

樣品質(zhì)量是影響各類測試實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素。 用于研究的樣品應(yīng)立即收集、制備、儲存和運(yùn)輸，以盡量減少實(shí)驗(yàn)的樣品收集時間。 應(yīng)特別注意易降解的樣本，例如胰腺； 以及易受微生物污染的樣品，例如尿液。

4.低溫處理 ：

樣品采集、標(biāo)記、記錄后，立即用液氮速凍，-80℃保存。 不要太相信 -80°C 冰箱。 一般建議蛋白質(zhì)組學(xué)研究的樣品保存時間不要超過一年，長期保存的樣品在使用前需要進(jìn)行定性檢查以確定穩(wěn)定性。

輝駿生物建議您在取樣時同時保留和備份樣品，以防止部分降解和延遲重新取樣。  即使所有樣品都合格，備份樣品也可以用于實(shí)驗(yàn)的不同方面（例如，定量驗(yàn)證、蛋白質(zhì)方面、生化方面等）。

iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)*輝駿服務(wù)優(yōu)勢

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iTRAQ技術(shù)實(shí)驗(yàn) 客戶文獻(xiàn)

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis. 2018，IF=14.299. 【研究內(nèi)容】：骨關(guān)節(jié)炎和軟骨退變過程中，WNT/β-catenin被激活的機(jī)制尚未完全明確，本研究利用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選了年輕（2月齡）和老齡（12月齡）小鼠的蛋白表達(dá)差異，并發(fā)現(xiàn)一種在老年軟骨中強(qiáng)烈上調(diào)的蛋白——酪氨酸激酶Fyn。為了探究Fyn促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展的機(jī)制，客戶將免疫沉淀（IP）與蛋白質(zhì)組學(xué)分析相結(jié)合，最終證明酪氨酸激酶Fyn可以通過激活β-catenin通路促進(jìn)關(guān)節(jié)炎，為骨關(guān)節(jié)炎提供了一個新的治療靶點(diǎn)。 使用技術(shù)：iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)分析、iTraq實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

2. Wu X.S. et al: Ubiquitin-specific protease 3 promotes cell migration and invasion by interacting with and deubiquitinating SUZ12 in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2019，IF= 7.068. 【研究內(nèi)容】：泛素特異性蛋白酶3 (USP3) 的異常表達(dá)可能在腫瘤發(fā)展中起重要作用，然而其促進(jìn)胃癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確。本研究利用itraq蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定了USP3過表達(dá)胃癌細(xì)胞與對照細(xì)胞之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)SUZ12對于USP3介導(dǎo)的胃癌活性是不可或缺的，USP3結(jié)合SUZ12，去泛素化SUZ12并使其穩(wěn)定。SUZ12敲除抑制USP3誘導(dǎo)的遷移、侵襲和EMT。結(jié)果表明USP3-SUZ12信號通路促進(jìn)胃癌發(fā)展。   使用技術(shù)：itraq定量實(shí)驗(yàn)、itraq定量蛋白組學(xué)檢測

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. 2019，IF=4.848. 【研究內(nèi)容】：臨床上早期卵巢漿液性癌較難發(fā)現(xiàn)，而高級別漿液性癌(HGSC)和低級別漿液性癌(LGSC)的蛋白表達(dá)譜將為診斷和化療提供重要信息。研究者通過iTRAQ技術(shù)對13例HGSC和7例LGSC患者的標(biāo)本進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析，共鑒定出323個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。IHC驗(yàn)證后，選擇天冬酰胺合成酶(ASNS)和細(xì)絲蛋白A(FLNA)進(jìn)行進(jìn)一步的功能研究。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ASNS和FLNA是HGSC和LGSC的不同的生物標(biāo)志物，可能對漿液性癌的預(yù)后和臨床治療有潛在的價(jià)值。 使用技術(shù)：itraq分析、itraq差異蛋白實(shí)驗(yàn)

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