TMT實驗原理：

Tandem Mass Tag? (TMT?) 是由美國Thermo公司研發(fā)的體外同重同位素標記的定量技術(shù)的專利產(chǎn)品，用于標記不同的蛋白樣品并同時進行高通量的 LC-MS/MS 的定量研究 。目前有 2-、6-、10- 等 3種通量類型，可分別平行處理 2個、6個和 10個樣品，顯著提高了蛋白樣品質(zhì)譜檢測的通量，減少所需質(zhì)譜機時；此外，由于采用了穩(wěn)定同位素標記不同樣品，在標記實驗之后所有樣品混合成一個進行后續(xù)處理，大大降低了實驗誤差，使得定量準確性顯著提高。

TMT同位素試劑標記多肽氨基基團后，等量混勻多肽并進行LC-MS/MS分析。一級質(zhì)譜中，不同樣品來源的同一肽段表現(xiàn)出相同的m/Z；二級質(zhì)譜中，化學鍵斷裂釋放出報告離子，低質(zhì)量區(qū)的報告離子強度反映了該肽段在不同樣品中的相對表達量，高質(zhì)量區(qū)的肽段碎片離子m/Z反映了該肽段的序列信息。質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)經(jīng)過數(shù)據(jù)庫檢索，即可得到樣本中所含蛋白及其表達差異。

TMT標記定量實驗流程：

2-、6-、10-個樣品分別提取總蛋白，取等量蛋白進行 Trypsin 酶切，得到相應樣品的多肽；分別用不同的 TMT 標簽對 2-、6-、10- 個樣品進行標記，隨后等量混合成一個樣品并進行LC-MS/MS 分析和后續(xù)的數(shù)據(jù)庫比對，鑒定出樣品中含有哪些蛋白以及每個蛋白在樣品中相對含量。

圖1：輝駿生物TMT標記定量蛋白質(zhì)組學實驗流程圖

輝駿生物TMT技術(shù)服務優(yōu)勢

TMT應用領域

基礎醫(yī)學：疾病標志物，發(fā)病機制，疾病分型等；

生物醫(yī)藥：藥物機理，藥效評價，藥物開發(fā)等；

農(nóng)林畜漁：抗逆脅迫，生長發(fā)育，耐藥，致病機理等。

TMT服務信息-輝駿生物

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TMT標記定量—輝駿生物客戶發(fā)表文獻

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis, 0:1–9 (2018，IF=14.299).

2. Global iTRAQ-based proteomic profiling of Toxoplasma gondii oocysts during sporulation. J Proteomics.(2016 , IF=5.168).

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. (2019，IF=4.848).

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