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酵母雙雜交篩選技術(shù)對于抑癌基因pVHL互作組的鑒定
發(fā)布時間:2022-11-03 13:46:03作者:輝駿生物-fitgene

Von Hippel-Lindau綜合征簡稱VHL綜合征,又稱VHL病,希佩爾-林道綜合征、林島綜合征,是一種常染色體顯性遺傳病。VHL病患者表現(xiàn)為多器官腫瘤綜合征。文獻報道VHL綜合征的發(fā)病率為1/91000~1/36000,患者60歲時外顯率可達90%。

 

VHL綜合征是由VHL基因的突變引起的,VHL基因是一種抑癌基因,其位于染色體3q25-26,編碼含有213氨基酸的VHL蛋白。VHL蛋白作為E3泛素連接酶復(fù)合體的組成成分,通過泛素化途徑參與缺氧誘導(dǎo)因子HIF的降解。VHL基因突變時,VHL蛋白功能喪失,導(dǎo)致HIF不能被正常降解而累積,引起下游分子(如血管內(nèi)皮生長因子、血小板源性生長因子等)表達升高而導(dǎo)致多腫瘤的發(fā)生。另外,研究發(fā)現(xiàn)攜帶VHL突變的雄性小鼠會出現(xiàn)睪丸發(fā)育異常、精子數(shù)量減少、精子發(fā)生受損和不育,以及多器官的血管化改變等無功能pVHL的常見標(biāo)志。

 

近日,來自意大利帕多瓦大學(xué)的研究團隊于cancers雜志上發(fā)表了一篇題為“Characterization of the pVHL Interactome in Human Testis Using High-Throughput Library Screening”的文章,他們使用酵母雙雜交篩選技術(shù),研究了人類睪丸中pVHL30的相互作用組,發(fā)現(xiàn)了與pVHL30互作的蛋白有61個,其中6個為之前已報道的,55個為新發(fā)現(xiàn)的。包括參與相關(guān)細胞通路的蛋白,如細胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細胞凋亡和細胞骨架調(diào)控,其中多種蛋白質(zhì)直接參與精子發(fā)生、生殖代謝和癌癥。

 

 

通過對篩選到的陽性克隆進行深入的生物信息學(xué)分析,研究者從新鑒定到的pVHL相互作用因子中發(fā)現(xiàn)確定了多個pVHL特異性結(jié)合基序,并證明了在人類癌癥中體細胞突變位點含有pVHL特異性結(jié)合基序。這些發(fā)現(xiàn)表明,pVHL除了參與癌癥形成,也可能在人類正常性腺發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用。

 

 

陽性克隆鑒定和生長結(jié)果展示

 

 

陽性克隆注釋分析

 

 

癌癥中突變蛋白包含本研究新發(fā)現(xiàn)的pVHL互作子

 


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