国内嫖妓在线视频,亚洲无码视屏,国产aⅴ一区二区,久久vs视频欧美色图国产vS视频欧美vS色图 ,韩国AV在线免费观看,欧美涩涩网

當(dāng)前位置:首頁 > 成功案例 > 技術(shù)專題 > 成功培養(yǎng)原代嚙齒動(dòng)物神經(jīng)元的7個(gè)技巧
客戶文章技術(shù)專題問題答疑
成功培養(yǎng)原代嚙齒動(dòng)物神經(jīng)元的7個(gè)技巧

原代神經(jīng)元培養(yǎng)物是研究細(xì)胞功能、蛋白質(zhì)相互作用和神經(jīng)毒性的有力工具,并有助于許多其他體外應(yīng)用。 培養(yǎng)神經(jīng)元的一些最大挫折可能是獲得低細(xì)胞產(chǎn)量和管理細(xì)胞死亡。 優(yōu)化你的神經(jīng)元準(zhǔn)備工作流程也可能既費(fèi)時(shí)又費(fèi)錢。輝駿生物的蛋白質(zhì)技術(shù)人員在下文提供七個(gè)技巧,或許能幫助提高你的初級神經(jīng)元培養(yǎng)物的完整性。


1. 創(chuàng)建具有理想基材的矩陣

2. 使用胚胎組織

3. 充分分離你的組織

4. 確保使用含有正確補(bǔ)充劑的無血清培養(yǎng)基

5. 了解適合你實(shí)驗(yàn)的密度

6. 快速工作

7. 讓你的文化適應(yīng)新環(huán)境

圖:神經(jīng)元準(zhǔn)備的一般工作流程


1. 創(chuàng)建具有理想基材的矩陣

神經(jīng)元與塑料或玻璃的單層附著需要細(xì)胞外基質(zhì)成分和其他粘附因子,尤其是由于它們的無血清環(huán)境。  為了確保你的神經(jīng)元在培養(yǎng)物中正確粘附、分化和生長,請務(wù)必在電鍍細(xì)胞之前用一種或多種底物覆蓋你的平板。   神經(jīng)元培養(yǎng)最常用的底物是多聚-D-賴氨酸、多聚-L-賴氨酸、多聚-L-鳥氨酸、纖連蛋白、膠原蛋白和層粘連蛋白。   通常,最常使用多聚-D-賴氨酸和多聚-L-賴氨酸。  重要的是要注意,當(dāng)使用聚 L-賴氨酸時(shí),選擇更高的分子量 (>MW 30,000–70,000),因?yàn)檩^短的聚合物可能對你的細(xì)胞有毒。  此外,確??椎恼麄€(gè)底部都被底物覆蓋,以避免細(xì)胞生長不均勻和結(jié)塊。   在電鍍神經(jīng)元之前,徹底清洗所有多余的底物,因?yàn)闅埩舻牡孜锟赡軐ι窠?jīng)元有毒。

 

2. 使用胚胎組織

最好使用胚胎動(dòng)物來培養(yǎng)神經(jīng)元。  產(chǎn)前動(dòng)物的大腦 (E16-E18) 的神經(jīng)元具有較少廣泛的過程和連接,使細(xì)胞在解離過程中不易受到損傷。  此外,產(chǎn)前大腦擁有許多未分化的細(xì)胞。   當(dāng)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),這些細(xì)胞比已經(jīng)分化的細(xì)胞更容易分化成神經(jīng)元。   相比之下,較老的腦組織的異質(zhì)性可能會(huì)用其他細(xì)胞類型(如星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞)污染培養(yǎng)物。

 

3. 充分分離組織

使用酶解、化學(xué)解離和機(jī)械解離的組合正確解離神經(jīng)組織非常重要。  如果組織沒有正確解離,可能會(huì)發(fā)生細(xì)胞聚集,使神經(jīng)元難以在培養(yǎng)中形成正確的連接。  我們建議在解剖后將神經(jīng)組織進(jìn)一步切成小塊,以幫助分離。   此外,請考慮你用于解離的酶。  例如,膠原酶比胰蛋白酶更溫和,在解離步驟中可能需要更多時(shí)間。

 

4. 確保使用含有正確補(bǔ)充劑的無血清培養(yǎng)基

在你的培養(yǎng)基中添加血清會(huì)導(dǎo)致你的細(xì)胞不正常分化,主要是星形膠質(zhì)細(xì)胞。  用于培養(yǎng)神經(jīng)元的適當(dāng)培養(yǎng)基和補(bǔ)充劑是市售的。   為了避免細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn),請務(wù)必在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)目股?,例如青霉?鏈霉素-谷氨酰胺混合物。  此外,當(dāng)最初對神經(jīng)元進(jìn)行電鍍時(shí),培養(yǎng)基中的少量 L-谷氨酸 (~0.025mM) 可以幫助神經(jīng)元生長和連接。  然而,為了避免細(xì)胞毒性,重要的是要了解培養(yǎng)基中的 L-谷氨酸濃度和培養(yǎng)暴露的持續(xù)時(shí)間。  最后,為了長時(shí)間保持健康的培養(yǎng),我們建議每三天用新培養(yǎng)基更換一半的培養(yǎng)基。

 

5. 了解適合你實(shí)驗(yàn)的密度

以理想的密度電鍍神經(jīng)元細(xì)胞對于培養(yǎng)的整體健康很重要。 電鍍細(xì)胞過于密集或過于稀疏都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞聚集,僅在電鍍幾天后就會(huì)在培養(yǎng)物中產(chǎn)生球狀體。 約 1,000–5,000 個(gè)細(xì)胞的密度鋪板 2 。 你的文化的理想密度取決于你的實(shí)驗(yàn)問題。 例如,在嘗試對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行成像時(shí),較低的密度是理想的,但在嘗試對低表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡時(shí),可能需要較高的密度。

 

6. 快速工作

一旦開始準(zhǔn)備神經(jīng)元,細(xì)胞就會(huì)陷入困境并有死亡的危險(xiǎn)!  因此,快速有效地工作很重要。  確保在開始神經(jīng)元準(zhǔn)備之前準(zhǔn)備好所有解決方案和設(shè)備。  此外,考慮加熱溶液以避免極端溫度變化,并在酶解過程中將組織置于 37°C 培養(yǎng)箱中以加速分離。

 

7. 讓你的文化適應(yīng)新環(huán)境

在鋪板后立即檢查你的細(xì)胞可能很誘人,但神經(jīng)元對其環(huán)境非常敏感。  溫度或攪動(dòng)的變化會(huì)干擾細(xì)胞并阻止它們生長。  最好盡可能讓培養(yǎng)物保持獨(dú)立,只在更換培養(yǎng)基和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療時(shí)打擾它們。

 

優(yōu)化神經(jīng)元制備方案后,你可以將培養(yǎng)物用于體外技術(shù),例如免疫細(xì)胞化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡、ELISA 或流式細(xì)胞術(shù)。


熱門推薦


蛋白組/代謝組實(shí)驗(yàn)
? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)

? Label Free 實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)itraq,label free,lc-ms/ms質(zhì)譜鑒定,DIA實(shí)驗(yàn),廣泛靶向代謝組學(xué)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
廣泛靶向代謝組學(xué)

蛋白/核酸相互作用實(shí)驗(yàn)
? GST pull down

? RNA pull downRNA pulldown,DNA pulldown,GST pulldown.png

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

? 熒光定量PCR (qPCR)分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn).jpg

? 載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)

? miRNA靶基因驗(yàn)證
慢病毒包裝

科研產(chǎn)品
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體慢病毒表達(dá)載體 慢病毒干擾載體 人cdna克隆庫.jpg

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達(dá)載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)
單克隆抗體測序抗體測序 抗體從頭測序 抗體表達(dá).jpg

? 抗體從頭測序

? 抗體表達(dá)服務(wù)

? 重組抗體表達(dá)

實(shí)驗(yàn)試劑盒
? RNA pull down 試劑盒RNA pulldown試劑盒 GST pulldown試劑盒 coip試劑盒 flag試劑盒 .jpg

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒




輝駿實(shí)力



電子郵箱

service@fitgene.com

聯(lián)系電話

020-32053431 / 400-699-1663

聯(lián)系地址

廣州市黃埔區(qū)科學(xué)城廣州國際企業(yè)孵化器D506

微信咨詢

微信掃碼一對一咨詢

服務(wù)熱線
4006991663
在線客服 返回頂部