抗體是免疫系統(tǒng)的重要組成部分; 對(duì)抗感染和疾病以保護(hù)身體。 研究此類蛋白質(zhì)的基因組成在幾種不同的應(yīng)用中非常重要,包括抗體工程、數(shù)據(jù)庫、功能優(yōu)化和新抗體克隆的發(fā)現(xiàn)。
可以用稱為雜交瘤技術(shù)的方法對(duì)單克隆抗體進(jìn)行工程改造和選擇。 最初宿主動(dòng)物被引入抗原 ,導(dǎo)致特定 B 細(xì)胞的產(chǎn)生。 幾周后,脾細(xì)胞被移除并與骨髓瘤細(xì)胞融合。
融合的細(xì)胞是永生的,經(jīng)過幾周的孵化,它們最終會(huì)產(chǎn)生抗體。 然而,一旦獲得這些抗體,就需要對(duì)其進(jìn)行篩選以確保特異性。 該篩選過程可以通過幾種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行,如下所述。
用于鑒定的早期方法核酸抗體序列 之一是 Sanger 測(cè)序的小規(guī)模方法。 在 Sanger測(cè)序中,樣本 DNA 被分成四個(gè)小瓶,其中包含所有四種脫氧核苷酸和DNA聚合酶。
隨著 DNA
在每個(gè)小瓶中轉(zhuǎn)錄,然后添加修飾的標(biāo)記二脫氧核苷三磷酸 (ddNTP),終止 DNA 延伸。 每個(gè)小瓶接收不同的 ddNTP,該 ddNTP會(huì)停止對(duì)不同核苷酸的測(cè)序。 然后可以通過電泳分離產(chǎn)生的片段,最終可以通過每個(gè)條帶的相對(duì)位置來識(shí)別 DNA 的序列。
該方法已用于抗體研究等多個(gè)行業(yè),并已于 2003 年在人類基因組計(jì)劃中用于對(duì)第一個(gè)人類基因組進(jìn)行測(cè)序。但是,該方法受到限制,因?yàn)樗浅B枰罅康娜斯すぷ鞑⑶胰菀壮鲥e(cuò)。 因此,已經(jīng)開發(fā)了現(xiàn)代方法來提高測(cè)序的通量和可靠性。
新一代測(cè)序技術(shù)是鑒定 DNA 核酸序列的現(xiàn)代方法。使用熒光標(biāo)記的 dNTP 可以更快地獲得結(jié)果,同時(shí)對(duì)數(shù)千個(gè)片段進(jìn)行測(cè)序。涉及四個(gè)主要階段:
●文庫制備 :DNA 樣本被片段化,并在每一端添加接頭。
●簇?cái)U(kuò)增 :片段與流動(dòng)槽表面雜交并倍增。
●測(cè)序 :將 試劑 添加到樣品中,然后開始測(cè)序。當(dāng)熒光標(biāo)記的抗體被摻入時(shí),它們會(huì)釋放特定波長的發(fā)射。
●分析 :通過生物信息學(xué)軟件從獲得的數(shù)據(jù)中推斷出DNA的序列。
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