Western Blot實驗過時了嗎？蛋白免疫印跡法（WB）有何優(yōu)勢？

自1979年Towbin等人首次提出以來，蛋白質免疫印跡（WB）被廣泛應用于檢測混合物中特定蛋白質的存在、評價目標蛋白質的大小和測量蛋白質表達水平。WB的過程包括使蛋白質混合物變性并基于分子量通過凝膠電泳分離它們，將分離的條帶轉移到印跡膜上，在封閉膜的剩余表面之后，用一抗識別感興趣的蛋白質并通過二抗檢測。

Western Blot實驗可以是在蛋白質表達期間測試細胞裂解物的快速和骯臟的方式，以查看感興趣的蛋白質是否表達以及表達水平是什么樣子。重要的是在純化前檢查來自用于桿狀病毒生產的P2擴增的沉淀或大腸桿菌表達沉淀。此外，如果SDS-PAGE的污染物條帶是非特異性殘留或產物降解，則可以從WB容易地獲得雜質信息，例如蛋白質污染物的水平。此外，當抗體是用于表達的目標蛋白質時，WB可以證明具有適當分子量的重鏈和輕鏈的功能性表達，并且它們正確配對。

蛋白質印跡western blot技術被認為是許多情況下必不可少的QC。例如，在體外測定中使用的蛋白質，其中通過抗體標記或蛋白質本身進行檢測，WB驗證是關鍵的。對于提交給監(jiān)管機構和同行評審期刊評審員的ELISA數(shù)據(jù)，WB也被廣泛接受為確認所用蛋白質正確的最小確認QC步驟。

WB技術實驗的局限性在于其重現(xiàn)性差且易于用于定量目的的錯誤。一抗特異性檢測目的蛋白是關鍵。應用WB有時受到缺乏針對蛋白質而不是標簽的完全驗證的抗體的限制。根據(jù)所用的表達系統(tǒng)（E.大腸桿菌、芽孢桿菌、HEK293、CHO等），但在一些情況下，可能存在其它蛋白質與表達中使用的標簽的非特異性結合，因此需要對表達系統(tǒng)“背景噪聲”進行徹底表征。具有高分子量的蛋白質在凝膠上的分辨較差，使得更難以進行WB。因此，需要另外的蛋白質QC和表征方法以獲得關于蛋白質純化和鑒定的更多信息。